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RTS BL21(DE3)Chaprone助溶表达感受态细胞

产品编号 产?#35775;?#31216; 规格 价格(元) 说明书
K0003 RTS BL21(DE3) Chaprone助溶表达感受态细胞 16支 800
BL21(DE3)Chaprone感受态细胞中含有分子伴侣蛋白质粒,其表达产物可协助重组蛋白正确折叠形成可溶活性蛋白。分子伴侣蛋白质粒为氯霉素抗性(chloramphenicol,Cmr)的表达受控于四环素(tetR)操纵子,因此该感受态不适用于氯霉素抗性表达质粒的转化。
BL21(DE3)Chaprone感受态细胞使用HaiGene独有的化学感受态专利技术制备,其室温可保存1个?#38534;?20°C可保存2年(推荐保存温度)、-80°C可长期保存性能无下降。运输过程中无需干冰,可室温运输、可常规冰袋运输(推荐运输温度)。该感受态细胞为热激感受态细胞,转用于蛋白表达(不可用于克隆和载体构建),经42°C热激1min可获得105~106cfu/μg效价,可满足质粒转化要求。该制品使用简单、运输、储存方便。

组分

组分名称 数量
RTS BL21(DE3)Chaprone Competent Cell 16支
Nano E.coli Transfection Reagent 0.6 ml×2

储存

-20°C可保存半年,-70度可保存2年;可室温运输。

使用方法

1. 从-20°C冰箱中取出Nano E.coli Transfection Reagent彻底融化,放置于冰上。注意:该试剂含长链带电化合物,允许反复冻融20次,使用完毕后继续-20°C保存。
2.取50 μl Nano E.coli Transfection Reagent置于0.2 ml EP管中,加入10~100 ng质粒DNA(不可使用连接产物、不可使用氯霉素筛选标记质粒),枪头吹打混合均匀,冰上放置2 min。
注意:放置时间不要超过30min,过长时间会导致核酸聚合,从而影响转化效价。
3. 将上述混合物(50 μl Nano E.coli Transfection Reagent和质粒DNA)加入到一支RTS BL21(DE3) Chaprone)感受态细胞干粉中,枪头轻轻吹打,彻底溶解细胞干粉,置于冰上15min。
注意:使用RTS BL21(DE3)Chaprone感受态细胞干粉前,轻甩干粉至管底部,如果发现干粉已经溶解则不可使用。
4. 置于42°C热激1 min后,迅速置于冰上急冷2 min。
5. 将热激完?#31995;?#24863;受态细胞转移到含有450 μl不含抗生素的SOC(或LB)培养基,37 °C振荡(225 rpm)培养60 min。
使质粒上抗性标记基因表达,菌体?#27492;鍘?
6. 取200 μl?#27492;站和?#24067;到含相应抗生素的LB琼脂平板表面。(含相应质粒抗生素和20 μg/ml氯霉素)
7. 将平板置于37 °C培养,12~18小时后可出现菌落。
8. 挑选生长良好的菌落,接入LB培养基(含相应质粒抗生素,20 μg/ml氯霉素),37 ℃剧烈振荡培养过夜。
9. 1/50比例接入新的LB培养基(含相应质粒抗生素,20 μg/ml氯霉素,0.5 mg/ml L-阿拉伯糖)37 ℃剧烈振荡培养OD600约0.3(约2h)。
10. 加入终浓度2 ng/ml四环素,37℃剧烈振荡培养至OD600约0.5(约2~4h)。
11. 加入适量IPTG(0.1-1 mM), 15℃振荡培养24h(培养摇床无法制冷条件下,室温诱导8~12h)。
12. 4,000 rpm室温离心15 min,收集细胞。

 
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